沉默PRKCD通过调控上皮-间质转化抑制肝癌Huh-7细胞的增殖和侵袭

目的 探讨蛋白激酶 Cδ(protein kinase Cδ,PRKCD)在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达水平、临床意义及其潜在的作用机制.方法 从癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库中下载 HCC的表达数据和临床数据,分析PRKCD在 HCC中的表达水平及其临床意义.收集 25 例 HCC患者的肿瘤组织及癌旁组织,采用免疫组化染色检测患者样本中的PRKCD蛋白表达水平.采用 Western Blot及 qRT-PCR法检测 PRKCD在正常肝上皮细胞和肝癌细胞系中的表达水平.通过构建 si-PRKCD慢病毒转染到肝癌细胞中,采用 CCK-8 实验评估沉默PRKCD对肝癌细胞增殖活性的影响.采用划痕实验、Transwell 侵袭实验明确 PRKCD对细胞迁移和侵袭的影响.最后,通过 Western Blot法检测PRKCD 对上皮-间质转化(epithelial to mesenchymal transition,EMT)关键蛋白(Vimentin、N-cadherin、E-cadherin、Slug)的内在调控作用.结果 TCGA数据库分析及免疫组化染色结果显示,肝癌组织中PRKCD的表达量显著高于癌旁组织(P<0.05).Kaplan-Meier曲线分析显示PRKCD低表达患者的总生存率(o-verall survival,OS)、无病间隔期(disease-free interval,DFI)、无病生存期(disease-free survival,DFS)显著高于PRKCD高表达患者.与正常肝上皮细胞 LO2 相比,PRKCD在肝癌细胞中的蛋白表达水平最高(P<0.05).与对照组比较,沉默PRKCD后,PRKCD蛋白表达量显著减少(P<0.05).肝癌细胞的增殖、侵袭、迁移能力明显降低(P<0.05).此外,沉默PRKCD后,Vimentin、N-cadherin、Slug 蛋白表达降低,而 E-cadherin 蛋白表达升高(P<0.05).结论 PRKCD是肝癌的潜在不良预后标志物,沉默PRKCD的表达能够抑制肝癌细胞的增殖和侵袭,其机制可能与上皮-间质转化过程有关.