基于RNA-Seq对淫羊藿次苷Ⅱ体内抗HBV时胰岛素信号通路基因的研究

目的 利用转录组测序(RNA-Seq)技术筛选淫羊藿次苷Ⅱ(ICS Ⅱ)作用于乙型肝炎病毒(HBV)复制型C57BL/6小鼠后肝脏的差异基因,探索ICS Ⅱ在抗HBV中对胰岛素通路相关基因的影响.方法 用高压水动力法建立HBV复制型C57BL/6 小鼠模型,建模后随机进行分组:模型(Model)组、生理盐水(NS)组、阳性药物恩替卡韦(ENT)对照组(0.5 mg/kg)和ICS Ⅱ组(20 mg/kg),每组5 只,灌胃给药(10 mL/kg),1d 1 次,连续给药20 d.采用荧光定量PCR技术检测血清样本中HBV DNA的拷贝量,确认ICSⅡ对HBV DNA有抑制作用后,用高通量Illumina HiSeq 2500 测序平台对小鼠肝脏样本进行转录组测序.对测序结果进行GO富集和KEGG通路注释,通过KEGG通路注释分析筛选出多条与ICSⅡ抗HBV相关的通路,并使用荧光定量PCR对胰岛素通路相关基因Hras、Gck、Phka2、Prkacb、Akt2、Grb2 进行验证分析.结果 ICS Ⅱ能明显抑制HBV DNA的复制,差异基因分析显示,Model组和ICS Ⅱ组相比,982 个基因上调,756 个基因下调(P＜0.05).注释到GO 数据库中的差异基因共有3675 个,有493 个差异基因被注释到226 条通路中.荧光定量PCR结果显示,在HBV感染的小鼠肝脏中ICSⅡ下调胰岛素通路相关基因Hras、Gck、Phka2、Prkacb、Akt2、Grb2 的转录水平(P＜0.05),和测序结果一致.结论 ICS Ⅱ可能通过下调胰岛素信号通路相关基因Hras、Gck、Phka2、Prkacb、Akt2、Grb2 发挥抗HBV作用.