U2AF2表达对肝细胞癌增殖和迁移的影响及其与预后的关系

目的:探讨U2小核RNA辅助因子2（U2AF2）表达对肝细胞癌增殖和迁移的影响及其与预后的关系。方法:采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测U2AF2在HCC细胞系（HepG2、Hep3B、Huh-7和HCCLM9）及正常肝脏细胞LO2中的表达水平。采用慢病毒介导的短发夹RNA（shRNA）敲低U2AF2在HCC细胞中的表达（shU2AF2-1、shU2AF2-2为实验组，sh-NC为对照组）。采用CCK-8和细胞划痕实验分别检测shU2AF2-1组和sh-NC组HCC细胞的增殖和迁移能力。Western bolt检测shU2AF2-1组和sh-NC组HCC细胞的哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）表达水平及其磷酸化（p-mTOR）水平。生物信息学分析采用UALCAN和Kaplan-Meier Plotter数据库分别分析U2AF2在HCC中的表达及其与HCC预后的关系。下载癌症基因组图谱（TCGA）数据库的HCC表达谱，采用基因集富集分析（GSEA）分析U2AF2在HCC中参与的信号通路。多组比较采用单因素方差分析，两组比较采用LSD-t或t检验。结果:TCGA数据库分析显示，HCC组织U2AF2 mRNA表达水平明显高于癌旁正常肝组织（P<0.05），U2AF2 mRNA表达水平随着HCC肿瘤分级的增高而增高（P<0.05）。Kaplan-Meier Plotter数据库分析显示，U2AF2高表达组患者总体生存率及无复发生存率明显低于低表达组（HR=1.86，1.85；P<0.05）。GSEA结果提示，U2AF2的高表达与mTOR通路密切相关，标准化富集得分（NES）为2.113（P<0.05）。qRT-PCR检测显示，U2AF2 mRNA在HepG2、Hep3B、Huh-7和HCCLM9细胞中表达水平明显高于正常肝脏细胞LO2，其中以HCCLM9细胞的表达最高（F=26.003，P<0.05）；shU2AF2-1和shU2AF2-2组HCCLM9细胞U2AF2 mRNA平均相对表达量分别为0.27±0.09、0.41±0.13，明显低于sh-NC组的1.02±0.06（LSD-t=-7.643，-6.220；P<0.05）。CCK-8实验显示，shU2AF2-1组HCCLM9细胞的增殖能力明显低于sh-NC组（t=-5.381，P<0.05）。细胞划痕实验显示，shU2AF2-1组HCCLM9细胞的迁移能力明显低于sh-NC组（t=-7.903，P<0.05）。Western blot检测显示，shU2AF2-1组HCCLM9细胞的p-mTOR水平明显低于sh-NC组，而两组mTOR水平无明显差异。结论:U2AF2在HCC中高表达，且U2AF2高表达和HCC的不良预后相关，U2AF2对HCC细胞增殖和迁移的促进作用可能是通过激活mTOR通路实现。