化浊解毒补肾方含药血清对肝星状细胞内雌激素受体转录激活的影响

目的 探讨化浊解毒补肾方延缓肝纤维化可能的作用机制.方法 SD大鼠随机分为化浊解毒补肾方含药血清组和空白血清组,无菌条件下收集腹主动脉血液制备血清.肝星状细胞(HSC-T6)分组为空白组、模型组(0.1mmol·L-1 H2O2干预诱导2h)、空白血清组+模型组、化浊解毒补肾方含药血清+模型组(含药血清浓度分别为2.5％、5％、10％、15％和20％)、E2(雌二醇)+模型组、ICI(ER拮抗剂)+空白血清组+模型组、ICI+化浊解毒补肾方含药血清+模型组、E2+ICI+模型组.MTT法测HSC-T6细胞增殖、流式细胞仪测细胞凋亡、免疫荧光染色法测细胞内α-SMA(α-肌动蛋白)荧光强度、Western blot法分析测细胞上清液Ⅰ型胶原蛋白、ER(雌激素受体)和α-SMA蛋白表达、qRT-PCR法分析细胞中ER-α、ER-β mRNA水平.结果 10％化浊解毒补肾方含药血清抑制H2O2诱导的HSC-T6细胞增殖和凋亡效果最佳(P＜0.0001).与空白组相比,模型组细胞α-SMA荧光强度显著增强,Ⅰ型胶原蛋白和α-SMA蛋白表达明显升高(P＜0.0001).与模型组相比,10％含药血清组和E2组细胞中α-SMA荧光强度显著减弱,Ⅰ型胶原蛋白和α-SMA蛋白表达均有显著下降,加入ICI后,α-SMA荧光强度显著增强(P＜0.05),Ⅰ型胶原蛋白和α-SMA蛋白表达明显增加.与对照血清组相比,10％含药血清组和E2组的ER-α和ER-β的蛋白水平均显著升高(P＜0.0001),ER-α、ER-βmRNA水平均显著升高;加入ICI后,ER-α和ER-β的蛋白表达和mRNA水平均显著降低.结论 化浊解毒补肾方通过对肝星状细胞内雌激素受体转录激活抑制肝星状细胞的增殖和活化来延缓肝纤维化的进展,具有一定的雌激素样作用.