基于多重PCR方法的新疆褐牛乳中乳房炎主要致病菌的检测

为了能同时检测到新疆褐牛乳房炎乳中无乳链球菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌和大肠杆菌四种致病菌,试验根据GenBank中的金黄色葡萄球菌nuc、大肠杆菌phoA、无乳链球菌ef-tu和沙门氏菌invA基因保守序列设计了 4对特异性引物,提取新疆褐牛77份乳样DNA,采用单一 PCR和多重PCR方法进行扩增,统计琼脂糖凝胶电泳结果并计算相应感染率,比较两种检测方法的符合率,并检测多重PCR方法在牛场中的应用效果.结果表明:单一PCR方法中以大肠杆菌和金黄色葡萄球菌感染为主,感染率分别为93.5％和76.6％.多重PCR方法中,以大肠杆菌+金黄色葡萄球菌+无乳链球菌的混合感染为主,感染率为24.7％;其次是大肠杆菌+金黄色葡萄球菌的混合感染,感染率为16.9％.对两种检测方法的结果进行比较,大肠杆菌+金黄色葡萄球菌+无乳链球菌及大肠杆菌+金黄色葡萄球菌混合感染的符合率分别为95％和93％;大肠杆菌+沙门氏菌+无乳链球菌的混合感染符合率为0,但多重PCR检出数量仅有2份;其余致病菌混合感染的符合率为100％.结合牧场的DHI报告及兽医诊断确认新疆褐牛中的乳房炎主要致病菌为大肠杆菌的单一感染和无乳链球菌+大肠杆菌的混合感染,感染率分别为53.8％、30.8％.说明该多重PCR方法可用于新疆褐牛乳房炎的诊断.