IFN-β启动子分泌性荧光素酶稳定表达细胞系的构建及鉴定

先天性免疫是细胞抵御病毒感染的第一道防线,I型干扰素(IFN)在抗病毒先天性免疫中发挥关键作用.干扰素β(IFN-β)作为I型IFN成员,是IFN通路激活的效应蛋白和指征蛋白,IFN-β启动子活性则是通路是否激活的重要指标.Gaussia luciferase(Gluc)是近年来发现的荧光素酶家族中最小的成员,呈分泌性表达,与常规荧光素酶相比具有诸多优势.为了建立一种新型、简易、稳定的IFN-β启动子活性检测方法,本研究首先将人IFN-β基因启动子以及下游Gluc克隆至慢病毒载体中,将其包装成慢病毒后感染A549细胞;使用杀稻瘟菌素筛选及有限稀释法稀释培养得到单克隆细胞,经PCR初步筛选得到稳定表达IFN-β-Gluc的A549细胞株,新城疫病毒和poly(I:C)处理单克隆细胞,筛选得到能够高水平诱导Gluc的阳性细胞株.进一步通过正向诱导(转染IFN-β信号通路相关蛋白质粒)和反向抑制实验(转染新城疫病毒V蛋白质粒)证实,并从基因及酶活性水平验证其表达IFN-β-Gluc的稳定性.该细胞系提供了检测IFN通路激活的简易方法,为进一步研究病毒诱导IFN-β的转录、调控,动态监测IFN-β启动子活性,高通量筛选等研究奠定了基础.