高效液相色谱法测定畜禽肉中8种生物胺含量国家标准方法的改进

针对国家标准方法GB 5009.208-2016操作繁琐,检测时间较长(约6 h)等问题,改进了提取方法和衍生方法,并应用于畜禽肉中色胺、尸胺、β-苯乙胺、酪胺、亚精胺、腐胺、组胺和精胺等8种生物胺含量的测定.取绞碎样品10 g,加入50 g?L-1三氯乙酸溶液20 mL、正己烷10 mL及1000 mg?L-11,7-二氨基庚烷内标溶液1.0 mL,混匀后涡旋15 min,超声提取15 min,离心5 min.取0.5 mL上清液置于10 mL比色管中,依次加入2 mol?L-1氢氧化钠溶液100μL、饱和碳酸氢钠溶液300μL、10 g?L-1丹磺酰氯衍生溶液2.0 mL,振荡混匀,于60℃反应15 min.加入100μL氨水,于60℃保温15 min,以终止衍生反应.加入乙腈稀释至5 mL,用0.22μm滤膜过滤,滤液注入高效液相色谱仪,在Phenomenex Kinetex色谱柱上以不同体积比的甲醇-水体系进行梯度洗脱,并用二极管阵列检测器检测.结果显示:样品可在1.5 h内完成检测,8种生物胺的质量浓度均在5.00～250 mg?L-1内与其对应的峰面积与内标物峰面积的比值呈线性关系,检出限(3 S/N)为4～21μg?kg-1;对实际样品进行加标回收试验和日内、日间精密度试验,回收率为80.4％～95.6％,日内(n=6)、日间(n=5)精密度试验测定值的相对标准偏差分别为1.9％～5.1％和2.3％～6.2％;方法用于20批畜禽肉的分析,除组胺外,其他7种生物胺均有不同程度检出.