基于sfGFP系统的嫁接体接口处的细胞质融合检测

为了探究接穗和砧木间的细胞如何相互作用而形成功能性嫁接体,利用自组装拆分的超折叠绿色荧光蛋白(sfGFP)系统来监测嫁接体接口处的细胞质融合发生事件.通过花侵染转化得到在细胞质中单独表达sfGFP1-10和mCherry-11的转基因拟南芥植株以及通过叶盘法转化得到在细胞质中单独表达sfGFP1-10和mCherry-11的转基因烟草植株.T1转基因拟南芥和T1转基因烟草在含相应抗生素的培养基中生长,培养8 d后选取生长健壮的幼苗用于嫁接,构建远缘嫁接体(At-1-10/Nb-11)、自体嫁接体(At-1-10/At-11、Nb-1-10/Nb-11)以及对照嫁接体(At-11/Nb-11、At-11/At-11、Nb-11/Nb-11).嫁接后第4天,利用激光共聚焦显微镜观察接口处GFP信号并统计嫁接体接口处的GFP荧光强度.结果显示:在嫁接后第4天,远缘嫁接体和自体嫁接体接口处均监测到GFP信号,且远缘嫁接体的GFP荧光强度显著高于自体嫁接.在细胞质中单独表达sfGFP1-10和mCherry-11的转基因拟南芥未嫁接幼苗、细胞质中单独表达sfGFP1-10和mCherry-11的转基因烟草未嫁接幼苗以及对照嫁接体中均未检测到GFP信号.结果表明:嫁接体接口处细胞质在嫁接后第4天已经发生融合,拆分的sfGFP片段在砧穗的连接下重组并发出荧光,定位于细胞质中,且远缘嫁接体和自体嫁接体在细胞质融合上存在差异;自组装拆分的sfGFP系统可用于检测嫁接体接口处细胞质的融合,为研究嫁接体接口处细胞学事件发生提供了新的视角.