雷帕霉素通过AKT/mTOR途径抑制川崎病冠状动脉内皮细胞炎症因子的表达

目的:探究雷帕霉素对川崎病(Kawasaki disease,KD)冠状动脉损害的抗炎作用及其分子机制.方法:体外培养人冠状动脉内皮细胞(human coronary artery endothelial cells,HCAEC),利用肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)刺激HCAEC 4 h以模拟KD的局部炎性病变,建立KD的细胞模型.整个实验分组为:对照组、TNF-α刺激组和TNF-α+雷帕霉素(50和100 nmol/L)组,雷帕霉素均于TNF-α刺激前24 h加入.通过RT-qPCR和Western blot检测各组炎症因子和自噬相关因子的mRNA及蛋白表达水平,并检测蛋白激酶B(protein kinase B,PKB/AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路和核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)的活化状态;单丹磺酰尸胺染色后用倒置荧光显微镜观察各组自噬泡的染色情况.结果:HCAEC经TNF-α刺激后炎症因子白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、IL-1β和IL-8的mRNA和蛋白表达水平均显著升高(P<0.01),自噬相关蛋白beclin-1表达水平和LC3-II/LC3-I比值显著下降(P<0.05),p62表达水平显著上升(P<0.05),同时磷酸化的AKT、mTOR(P<0.01)及NF-κB(P<0.05)蛋白水平显著上升.经雷帕霉素处理后AKT/mTOR(P<0.01)及NF-κB(P<0.05)信号通路被抑制,自噬水平激活(P<0.05),各炎症因子的表达水平显著下降(P<0.01).结论:雷帕霉素可能通过AKT/mTOR信号通路调节自噬水平,并抑制NF-κB信号转导通路,从而降低KD冠状动脉内皮细胞炎症因子的表达.