静电场轨道阱质谱法测定人泪液蛋白研究

目的 采用纳升液相色谱-四极杆-静电场轨道阱质谱法检测人泪液蛋白,并对主要蛋白质进行生物信息学分析.方法 通过毛细管虹吸收集成人泪液样品于3k Da超滤管,400μL超纯水,12 000×g离心15 min,重复4次提取泪液蛋白,经胰蛋白酶消化后,经Waters NanoAcquity peptide BEH C18色谱柱(1.7μm,100 μm×100 mm)分离,纳升液相色谱-四极杆-静电场轨道阱质谱检测,以0.1％甲酸水溶液和乙腈(0.1％甲酸)为流动相,电喷雾正离子模式电离,Full MS/dd-MS2监测模式测定,采用Proteome Discoverer 2.1软件检索Uniprot蛋白质数据库鉴定蛋白质种类,采用牛血清白蛋白进行方法学验证.基于String数据库对泪液蛋白进行基因注解分析.结果 获得人泪液蛋白(387±16)种,相对标准偏差为4.13％,其中脂质运载蛋白1、溶菌酶和乳铁蛋白等25种蛋白的相对丰度较高.牛血清白蛋白肽段覆盖率为(86.08±2.61)％,相对标准偏差为3.03％.25种主要泪液蛋白参与多细胞间物质传导、稳态过程、内肽酶活性的负调控、化学刺激物的检测和体液免疫反应等作用,其中16种蛋白相互作用紧密,相对丰度较高的催泪蛋白、脂质运载蛋白1、乳铁蛋白、溶菌酶和锌α2糖蛋白具有较多的连接.结论 纳升液相色谱-四极杆-静电场轨道阱质谱法稳定可靠,适用于泪液中多种蛋白质的检测.