卵巢细胞系糖脂代谢紊乱模型的构建及机制探索

目的 通过在培养基中加入葡萄糖及油酸,模拟糖脂代谢紊乱时体内高糖高油酸微环境,建立中国仓鼠卵巢(CHO)细胞代谢紊乱模型并探究作用机制.方法 培养卵巢细胞系CHO细胞,将细胞分为4组:对照组(C组)、单独高油酸模型组(O组)、单独高糖模型组(G组)、高糖高油酸联合模型组(GO组),采用25 mmol·L-1的葡萄糖与62.5μmol·L-1的油酸,分别诱导不同时长,选择最佳处理时间和药物处理方式,建立细胞模型,通过CCK-8检测细胞增殖水平,倒置显微镜观察模型细胞形态变化,Western blot、免疫荧光染色等方式检测半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达,通过磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(p-AMPK)以及磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)的蛋白表达,初步探索其机制.结果 HE染色可见,与C组相比,O组、G组和GO组细胞数量均减少(P均<0.05),且细胞形态由长梭形皱缩变圆;CCK-8结果显示,高糖高油酸联合处理24 h细胞增殖水平变化最明显,且与C组相比,O组、G组和GO组在24 h时细胞增殖率均下降(P均<0.05);对细胞蛋白进行Western blot实验,与C组相比,O组、G组和GO组CHO细胞Caspase-3蛋白表达增加,G组及GO组PCNA蛋白表达减少(P均<0.05).细胞免疫荧光染色结果亦显示,与C组相比,GO组细胞Caspase-3的表达增加(P<0.05),PCNA表达降低(P<0.05).与C组相比,O组、G组及GO组CHO细胞中p-AMPK蛋白表达减少,G组p-mTOR蛋白表达增加(P均<0.05).结论 给予CHO细胞高油酸、高糖和高糖高油酸联合处理均可以导致细胞处于代谢紊乱微环境,并用作研究糖脂代谢紊乱对CHO细胞作用的体外模型.