miRNA-26b-3p通过靶向STAT3调控食管鳞状细胞癌细胞的增殖和迁移

目的:观察miR-26b-3p在食管鳞状细胞癌(ESCC)组织中的表达水平及其对ESCC细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响,并探讨其分子调控机制.方法:选取河北医科大学第四医院2018年4月1日至2018年12月25日手术切除的ESCC组织及相应癌旁组织各60例,利用qPCR法检测ESCC组织、癌旁组织和ESCC细胞中miR-26b-3p的表达.选取miR-26b-3p表达水平较低的ESCC细胞TE1和KYSE150,转染miR-26b-3p mimic,并设立阴性对照.利用细胞增殖实验、划痕愈合实验和Transwell实验检测过表达miR-26b-3p对TE1和KYSE 150细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响.荧光素酶报告基因实验检测miR-26b-3p与STAT3的3'UTR靶点部位的结合情况.随后同时转染miR-26b-3pmimic和pcDNA3.0-STAT3,利用细胞增殖实验、划痕愈合实验和Transwell实验检测STAT3是否可逆转过表达miR-26b-3p对细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响.qPCR和WB法检测甲基化酶抑制剂5-Aza-DC对ESCC细胞甲基化的影响和miR-26b-3p与STAT3表达的影响.结果:miR-26b-3p在ESCC组织中的表达低于癌旁组织(P＜0.01),其在ESCC细胞TE1、KYSE150和LYSE170中表达水平显著低于人正常食管上皮细胞HEEC(均P＜0.01).与miR-26b-3pNC组相比,miR-26b-3p mimic转染可明显上调TE1和KYSE150细胞中miR-26b-3p的表达(均P＜0.01),但可明显抑制两种细胞的增殖、迁移和侵袭能力(P＜0.05或P＜0.01).荧光素酶报告基因实验结果表明,在TE1和KYSE150细胞中,miR-26b-3p明显抑制了野生型STAT3载体的荧光素酶活性(P＜0.05或P＜0.01),而突变型的荧光素酶活性不受影响.同时转染miR-26b-3p mimic和pcDNA3.0-STAT3可部分逆转miR-26b-3p mimic对TE1和KYSE150细胞增殖、迁移和侵袭能力的抑制作用(P＜0.05或P＜0.01).5-Aza-DC处理后,TE1和KYSE 150细胞中miR-26b-3p表达上调(均P＜0.01)、STAT3mRNA和蛋白水平降低(P＜0.05),miR-26b-3p呈现去甲基化状态.结论:miR-26b-3p的启动子高甲基化导致其在ESCC组织和细胞中的表达下调,其作为抑癌因子可通过靶向STAT3而抑制ESCC细胞的增殖、侵袭和迁移能力.