沙格列汀激活AMPK-PPARα途径促进巨噬细胞向M2型极化减轻动脉粥样硬化的作用研究

目的 探讨沙格列汀对巨噬细胞极化的影响,以及沙格列汀减轻动脉粥样硬化的可能机制.方法 ApoE-/-小鼠给予高脂饲料喂养,建立动脉粥样硬化模型,以C57BL/6小鼠作为对照组,喂养8周后,以15 mg/kg沙格列汀灌胃给药,1次/d,给药12周后,全自动生化仪分析小鼠血脂水平变化,HE染色观察主动脉组织形态学变化,油红O染色检测主动脉斑块面积变化,免疫组织化学染色检测主动脉中iNOS和Arg-1表达,Western blot检测巨噬细胞极化相关蛋白与AMPK-PPARα途径相关蛋白表达.将RAW264.7细胞随机分为对照组、诱导组(1μg/ml LPS和20 ng/ml IFN-γ诱导24 h)、沙格列汀组(细胞诱导后,使用含1μmol/L沙格列汀的培养液培养24 h)、AMPK抑制剂组(10μmol/L AMPK抑制剂Compound C预处理细胞2 h,再进行诱导和沙格列汀处理),各组对应处理后收集细胞,实时荧光定量PCR检测巨噬细胞极化相关基因表达情况,免疫荧光染色检测M1巨噬细胞和M2巨噬细胞表达变化.结果 与对照组比较,模型组小鼠血清中TG、TC和LDL-C水平升高,HDL-C水平降低(P<0.05),主动脉内膜增厚,形成明显的斑块(P<0.05);与模型组比较,经过沙格列汀治疗后,小鼠血脂水平及斑块形成得到明显改善(P<0.05).与对照组比较,模型组主动脉iNOS表达升高,Arg-1及p-AMPK、PPARα蛋白表达均下降(P<0.05);与模型组比较,沙格列汀组主动脉iNOS表达下降,Arg-1及p-AMPK、PPARα蛋白表达升高(P<0.05).与对照组比较,诱导组RAW264.7细胞中PPAR-α、TGF-β、Arg-1 mRNA表达水平下调,TNF-α、IL-6 mRNA表达水平上调(P<0.05),M1型标志物iNOS阳性比例升高,M2型标志物CD206阳性比例下降(P<0.05);与诱导组比较,沙格列汀组PPAR-α、TGF-β、Arg-1 mRNA表达水平上调,TNF-α、IL-6 mRNA表达水平下调(P<0.05),M1型标志物iNOS阳性比例下降,M2型标志物CD206阳性比例升高(P<0.05);与沙格列汀组比较,AMPK抑制剂组PPAR-α、TGF-β、Arg-1 mRNA表达水平下调,TNF-α、IL-6 mRNA表达水平上调(P<0.05),同时,M1型标志物iNOS阳性比例升高,M2型标志物CD206阳性比例下降(P<0.05).结论 沙格列汀可促进巨噬细胞向M2型极化,改善动脉粥样硬化,其作用机制可能与激活AMPK-PPARα途径相关.