STAT3抑制剂LL1增强结直肠癌对5-FU的敏感性

目的 研究新型小分子STAT3抑制剂LL1对结直肠癌细胞对5-FU敏感性的影响,并初步探讨其机制.方法 不同浓度LL1(0,2,4μmol/L)处理结直肠癌HT-29细胞24 h,使用RT-PCR法检测各组细胞c-Myc、Survivin和Bcl-2 mRNA表达水平.CCK-8法检测不同浓度的LL1(0,1,2,4,6,8μmol/L)、5-FU(0.1,1,10,100,1000μmol/L)以及5-FU(0.1,1,10,100,1000μmol/L)+LL1(2μmol/L)联用后结直肠癌HT-29细胞的存活率并比较组间存活率差异性.集落克隆实验检测空白对照组、0.8μmol/L 5-FU组(低浓度5-FU组)和0.8μmol/L 5-FU+0.1μmol/L LL1组(低浓度联用组)细胞集落形成能力.流式细胞仪检测空白对照组、1μmol/L 5-FU+2μmol/L LL1组(高浓度联用组)和1μmol/L 5-FU组(高浓度5-FU组)细胞凋亡.Western blot法检测空白对照组,1μmol/L 5-FU+2μmol/L LL1组与1μmol/L 5-FU组STAT3及下游蛋白c-Myc、Survivin和Bcl-2表达情况.结果 与0μmol/L组相比较,2,4μmol/L LL1组HT-29细胞中c-Myc、Survivin和Bcl-2 mRNA表达水平显著下降(P<0.05).LL1可抑制结直肠癌HT-29细胞增殖.与相应浓度5-FU组相比,5-FU+LL1联用组结直肠癌HT-29细胞存活率明显降低(P<0.05).与空白对照组相比,低浓度联用组和低浓度5-FU组集落数均显著减少(P<0.05),且低浓度联用组集落数小于低浓度5-FU组(P<0.05).与空白对照组相比,高浓度联用组和高浓度5-FU组细胞凋亡率均显著增加(P<0.05),且高浓度联用组凋亡率大于高浓度5-FU组(P<0.05).与高浓度5-FU组相比,高浓度联用组p-STAT3及下游蛋白c-Myc、Survivin和Bcl-2表达水平显著下降(P<0.05).结论 LL1增强结直肠癌HT-29细胞对5-FU敏感性,其可能机制是抑制STAT3基因活化并影响下游基因表达.