蚊母草提取物通过抑制Runx2活性抗乳腺癌破骨性骨转移作用

目的:研究蚊母草提取物(EVP)的抗乳腺癌破骨性骨转移作用.方法:采用左心室注射肿瘤细胞法建立裸鼠骨转移模型,通过巢式聚合酶链式反应(PCR)检测裸鼠骨髓组织中人细胞角蛋白-19(Ck-19)基因表达量确定肿瘤细胞的骨转移程度及EVP的抑制作用;采用多核细胞计数法及组织蛋白酶K(Cathepsin K)分泌量检测法,确定小鼠破骨细胞前体骨髓巨噬细胞(BMMs)的活性,并观察EVP(40、80、160g·L-1)的抑制作用;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)观察EVP对BMMs细胞内核转录因子-κB受体活化因子(RANK)、Runt相关转录因子2(Runx2)、磷酸化Runx2(p-Runx2)及其下游蛋白基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响;采用明胶酶谱法检测EVP对基质金属蛋白酶(MMPs)水解明胶活性的影响.结果:与空白组比较,裸鼠给予EVP5.5、11、22g·kg1,其骨髓组织中人Ck-19水平明显降低(P＜0.05),提示EVP具有抗骨转移作用;体外实验显示,与空白组比较,可溶性核转录因子-κB受体活化因子配基(sRANKL)可诱导BMMs分化为多核细胞(P＜0.05),EVP(40、80、160g·L-1)可显著抑制上述sRANKL诱导的多核细胞形成(P＜0.01).与空白组比较,sRANKL可显著增加BMMs的Cathepsin K分泌(P＜0.01);与sRANKL组比较,EVP组Cathepsin K分泌量明显下调(P＜0.05).Western blot显示,与空白组比较,sRANKL可显著增加BMMs细胞RANK表达(P＜0.01);与sRANKL组比较,EVP组(40、160g·L-1)BMMs细胞表达RANK蛋白明显降低(P＜0.05).与空白组比较,sRANKL可明显增加BMMs细胞p-Runx2和MMP-9表达(P＜0.05);与sRANKL组比较,EVP组(40、160g·L-1)BMMs细胞表达的p-Runx2和MMP-9蛋白明显降低(P＜0.05).明胶酶谱显示,与空白组比较,sRANKL可明显增加 pro-MMP-9、pro-MMP-2及64 kDa MMP-2水平(P＜0.05);与 sRANKL 组比较,EVP 组 pro-MMP-9、64 kDa MMP-2水平明显降低(P＜0.05),且160g·L-1EVP处理可明显降低pro-MMP-2水平(P＜0.05).结论:蚊母草提取物可抑制肿瘤细胞诱导的破骨性骨转移,抑制骨形成相关转录因子Runx2活化,进而干扰RANK/RANKL信号转导从而抑制破骨细胞活化可能是其作用机制之一.