激素处理下马尾松茎干组织qPCR内参基因的筛选

马尾松(Pinus massoniana)的利用价值极高,施加外源激素可促进其茎干的次生生长和木材形成,快速提高生长速度.筛选激素处理下马尾松茎干qPCR实验的最佳内参基因,可为马尾松次生生长的基因表达研究提供技术支持.本研究从马尾松茎干转录组数据库选取14个候选内参基因,利用qPCR技术进行基因表达分析,采用GeNorm、NormFinder和BestKeeper三款软件分析候选内参基因在不同激素—生长素(auxin,IAA)、赤霉素(gibberellin,GA3)和油菜素内酯(brassinolide,BR)处理条件下马尾松茎干中的表达稳定性,并借助目的基因—纤维素合成酶2(cellulose synthase 2,CESA2)对筛选出的内参基因进行验证.结果显示,在不同激素处理下,表达稳定性最佳的内参基因为磷酸胆碱胞二苷酰基转移酶1基因(phosphoate cytidine transferase 1,PCYT1)、泛素结合酶 E2D 基因(ubiquitin-conjugating enzyme E2D,UBE2D)和磷酸葡萄糖变位酶基因(phosphoglucomutase,PGM);目的基因CESA2在激素处理下的表达模式证实上述内参基因组合具有良好的可靠性.本研究筛选的内参基因有助于提高马尾松qPCR实验的准确性和可靠性,为在激素处理下的马尾松基因表达分析提供技术支持.