Cibler p16INK4a-/− et les pneumocytes de type 2 pour induire une régénération alvéolaire endogène

Introduction Les pneumocytes de type 2 (p2) jouent un role cle dans les processus de regeneration apres des dommages alveolaires. Les mecanismes sous-jacents sont peu connus. L’objectif de ce travail est d’examiner si l’inhibiteur du cycle cellulaire p16INK4a module des proprietes des p2 et augmentant leurs capacites a induire une regeneration alveolaire. Methodes Des organoides pulmonaires ont ete realises par la mise en co-culture de cellules EpCAM+ obtenues par tri cellulaire magnetique (CD31-, CD45-, CD16/32-, CD90-, CD271-, Ter119-, EpCAM+) a partir de poumon de souris p16INK4a-/− ou WT avec des fibroblastes primaires pulmonaires WT. Une analyse de la taille et du nombre de colonies d’organoides formees (colony forming unit : CFU) et du type d’organoides (alveolaires ou bronchiques avec les marquages proSpC et acetylated tubulin-ACT) a ete realisee a 14 et 21 jours de culture. Dans un deuxieme temps, ces organoides ont ete obtenus a partir de poumon de souris emphysemateuses (J21 apres instillation d’elastase 2UI) compare a des souris controles (serum physiologique), p16INK4a-/− ou WT. Des analyses morphometriques (mean linear intercept) et le nombre de p2 ont ete realises 21 et 90 jours apres elastase. Resultats Les organoides formes de cellule EpCAM- p16INK4a-/− avaient une taille plus importante que ceux forme a partir d’EpCAM-WT a J14 (p = 0,046) et J21 (p = 0,0001). La majorite des organoides etaient alveolaires. La taille des organoides issus de souris emphysemateuses etait plus basse par rapport aux controles (p = 0,019), avec une tendance a la diminution du nombre de CFU. Les organoides issus de souris emphysemateuses p16INK4a-/− etaient de taille plus importante et plus nombreux que ceux issus de souris emphysemateuses WT. In vivo, la deletion de p16 etait associee 21 jours apres instillation d’elastase a un nombre plus important de p2 dans le poumon sans impact sur l’emphyseme. 90 jours apres elastase, les souris p16INK4a-/− avaient moins d’emphyseme (mean linear intercept) que les souris WT. Conclusions Inhiber p16INK4a augmente les capacites de regeneration endogene alveolaire des p2. Les mecanismes impliques restent a determiner.