田蓟苷抗脑缺血再灌注程序性坏死的作用及机制研究

目的 研究田蓟苷抗脑缺血再灌注损伤程序性坏死的作用及机制.方法 人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y用Caspase抑制剂Z-VAD-FMK预处理16 h后缺氧培养6 h、复氧培养2 h建立脑缺血再灌注程序性坏死模型,在缺氧前6 h给予田蓟苷进行干预.采用Hoechst33342/PI染色检测坏死细胞数目;采用CCK-8法检测细胞活力;采用ELISA法检测细胞上清中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性和白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平及细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平和线粒体通透性转换孔(mitochondrial permeability transition pore,mPTP)的变化;采用荧光显微镜检测细胞线粒体膜电位变化;采用Western blotting法检测细胞程序性坏死通路相关蛋白如受体相互作用蛋白3(receptor interacting protein kinase 3,RJPPK3)、混合系结构域样蛋白(mixed lineage kinase domain-like protein,MLKL)、钙/钙调蛋白依赖性激酶 Ⅱ(calcium/calmodulin-dependent protein kinase Ⅱ,CaMKⅡ)、磷酸甘油酸变位酶5(phosphoglycerate mutase family 5,PGAM5)表达情况.结果 与模型组比较,田蓟苷组细胞存活率显著提高(P＜0.05);细胞上清中LDH活性和IL-1β、IL-6、TNF-α水平均显著降低(P＜0.05);细胞内ROS水平显著降低(P＜0.05);细胞线粒体膜电位显著升高(P＜0.05),mPTP开放被显著抑制(P＜0.05);细胞RIPK3、MLKL、CaMKⅡ和PGAM5蛋白表达水平均显著降低(P＜0.05).结论 田蓟苷可能通过抑制程序性坏死途径,保护线粒体,从而发挥抑制脑缺血再灌注损伤的作用.