侏儒蛤TRAF基因家族的研究

双壳软体贝类缺乏获得性免疫,因此先天免疫防御系统在其应对外界病原刺激时发挥着至关重要的作用.其中,肿瘤坏死因子受体相关因子(TRAF)作为保守的参与先天免疫反应的关键蛋白,可通过与TLR、TNFR等不同关键跨膜受体相结合,特异性识别不同病原并启动相应的免疫应答.本研究以侏儒蛤(Mulinia lateralis)为研究对象,对TRA F基因家族进行鉴定,并进一步探索MlTRA Fs基因在侏儒蛤生长发育中的作用和鳗弧菌侵染后的免疫应答.通过筛查侏儒蛤的基因组和转录组,共鉴定出5个MlTRA F基因,分别为MlTRA F2,MlTRA F3,MlTRA F4,MlTRA F6和Ml-TRA F7.研究发现,多数MlTRAF蛋白C末端含有一个保守的MATH结构域,而MlTRAF7蛋白则在C末端含有7个重复的WD40结构域.在构建的系统发生树中可以发现,双壳类T RA F2形成独立进化枝,与其他物种T RA F2同源蛋白以及TRAF1聚在一起;而TRAF6与TRAF7亲缘关系较近,并与TRAF4聚在一起.MlTRA Fs具有多样的时空表达模式,例如,MlTRA F6主要在多细胞胚胎发育早期和雌性性腺中高表达,而MlTRA F2、MlTRA F3主要在D型幼虫后各发育时期以及肝胰腺组织中高表达,暗示其功能的分化.对MlTRA Fs在鳗弧菌侵染侏儒蛤宿主24 h内的表达进行检测,发现各成员的显著上调表达均可被检测到.肝胰腺中,MlTRA F4和MlTRA F7在3 h表现出显著上调,且MlTRA F6、Ml-TRA F2分别在12、24 h显著上调表达;在雌性、雄性性腺中,仅MlTRA F7分别在3、12 h显著上调表达;全组织混和样品中,MlTRA F2和MlTRA F6在3和12 h表现出显著上调,同时,MlTRA F3在6 h显著上调,MlTRA F7在12、24 h显著上调.综上,MlTRA F7是唯一一个在4组样品中均被检测到鳗弧菌侵染后显著上调表达的成员,可作为候选免疫调控指示基因,也为深入理解双壳贝类中T RA Fs在机体免疫防御中的作用提供参考.