管花肉苁蓉实时荧光定量PCR分析中内参基因的选择和验证

本实验基于管花肉苁蓉的转录组数据,选择了12个常用候选内参基因,研究其在管花肉苁蓉不同组织中以及不同非生物胁迫下的稳定性.利用geNorm、NormFinder和BestKeeper三种常用软件计算候选内参基因的稳定性,并用RefFinder对其综合稳定性进行评价.实验结果表明,在愈伤组织中,EF-1α和ACT是干旱胁迫下内参基因的最佳组合;RPL和PP2A是盐处理下最稳定的两个内参基因;重金属胁迫下,H2A和F-box是最合适的内参基因,而ACT和F-box是冷处理和水杨酸处理下最稳定的内参基因;茉莉酸甲酯处理样本中最合适的内参基因是α-TUB2、F-box和GAPDH.种子中,EF-1α与F-box是脱落酸处理下的最佳内参基因;EF-1α和H2A结合分别是赤霉素处理下最合适的内参基因;而ACT和DNAj是氟啶酮处理下最稳定的内参基因.此外,DNAj和F-box被认为是最适合管花肉苁蓉中各组织的内参基因组合.本研究还对愈伤组织中G6PDH1和G6PDH2在不同非生物胁迫条件下的相对表达水平进行了研究,证明内参基因的选择对实时荧光定量PCR结果精确度有很大影响.