表达鸡传染性喉气管炎病毒gB基因的重组鸡痘病毒rFPV-ILTVgB的理化特性及遗传稳定性研究

为检测各理化因子对表达鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)gB基因的重组鸡痘病毒rFPV-ILTVgB的影响,并探究其在体内体外的遗传稳定性,本研究将rFPV-ILTVgB经热、酸、碱、氯仿、乙醚和胰酶分别处理后,接种于鸡胚成纤维细胞(CEF)中,测定病毒的半数感染量(TC1D50),结果显示:rFPV-ILTVgB经55℃水浴30 min或60℃水浴15 min可被完全灭活;经pH3～pH9的酸碱作用或经24 h的乙醚作用,病毒滴度变化不明显;经胰蛋白酶或氯仿处理后,病毒滴度下降明显;将rFPV-ILTVgB在CEF中连续培养30代,取第0、5、10、15、20、25、30代rFPV-ILTVgB分别扩增gB基因并测序,通过间接免疫荧光试验鉴定gB蛋白的表达,结果显示:rFPV-ILTVgB能在CEF细胞中稳定传代,gB基因序列在传代过程中未发生任何突变,gB蛋白稳定表达;同时将rFPV-ILTVgB在SPF鸡体内连续传代,结果显示,rFPV-ILTVgB在SPF鸡体内的传代过程中,gB基因的阳性检出率逐渐降低,对鸡体的致病性逐渐降低,不存在毒力返强的可能,符合生物制品的相关要求.本研究选取表达ILTV优势流行株gB基因的rFPV-ILTVgB,首次从分子生物学和遗传学等角度研究该疫苗候选株,为后续该疫苗的生产、运输提供参考.