C26结肠癌细胞与RAW264.7巨噬细胞共培养体系诱导C2C12细胞肌管萎缩及甘草多糖的保护作用

目的:基于C26结肠癌细胞与RAW264.7巨噬细胞共培养体系,构建C2C12细胞肌管萎缩模型,利用该模型研究甘草多糖对肌管的保护作用及机制.方法:构建C26细胞和RAW264.7细胞共培养体系,分别制备单一细胞和共培养细胞的条件培养液.加入诱导分化液使C2C12成肌细胞形成肌管.①将已分化的C2C12细胞分为对照组、C26模型组、RAW264.7模型组、共培养模型组.各组分别给予相应的条件培养液,孵育48 h,HE染色观察肌管形态,并测定肌管直径.②将已分化的C2C12细胞分为对照组及甘草多糖不同浓度(0.312 5、0.625、1.25、2.5、5 mg/ml)组,分别给予相应浓度的甘草多糖,孵育48 h后,测定细胞活力.③将已分化的C2C12细胞分为对照组、C26模型组、C26+甘草多糖组.除对照组外,其他各组均给予C26结肠癌细胞条件培养液;同时,甘草多糖干预组分别给予0.5、1、2 mg/ml甘草多糖.孵育48 h后,HE染色观察肌管形态,并测定肌管直径.④将已分化的C2C12细胞分为对照组、共培养模型组、共培养+甘草多糖组.除对照组外,其他各组均给予共培养细胞条件培养液;同时,甘草多糖干预组分别给予0.5、1、2 mg/ml甘草多糖.孵育48 h后,HE染色观察肌管形态,并测定肌管直径.⑤不同的条件培养液或共培养条件培养液与甘草多糖(2 mg/ml)协同干预后,Western blot检测信号传导与转录激活因子3(STAT3)蛋白表达及磷酸化水平.结果:①3种条件培养液均可诱导肌管直径减小(P＜0.01),且共培养模型组的相对肌管直径较C26模型组显著降低(P＜0.05).②≤2.5 mg/ml甘草多糖对细胞活力无明显影响.③与C26模型组相比,C26+甘草多糖(0.5、1和2 mg/ml)组细胞的相对肌管直径显著升高(P＜0.01).④与共培养模型组相比,共培养+甘草多糖(0.5、1和2 mg/ml)组细胞的相对肌管直径显著升高(P＜0.01).⑤3种条件培养液干预后均可诱导C2C12肌管细胞STAT3磷酸化水平升高,且共培养模型组的p-STAT3/STAT3蛋白表达比值明显高于C26模型组(P＜0.01).与共培养模型组相比,共培养+甘草多糖(2 mg/ml)组p-STAT3/STAT3蛋白表达比值显著下调(P＜0.01).结论:甘草多糖可能通过抑制STAT3信号通路减轻C26结肠癌细胞与RAW264.7巨噬细胞共培养体系诱导的肌管萎缩.