靛玉红及丹参酮Ⅱa促进雄黄降解突变型PMLA216T-RARα的作用机制研究

目的 探讨靛玉红及丹参酮Ⅱa联用促进雄黄降解突变型PMLA216T-RARα的作用机制.方法 用不同浓度雄黄作用于野生型及突变型PMLA216T-RARα,观察2组细胞PML-RARα降解作用,验证PMLA216T-RARα存在砷剂耐药.根据CCK8测出的IC50值确定各组分浓度,使用不同浓度、不同组合的雄黄、靛玉红、丹参酮Ⅱa作用于转染PMLA216T-RAR1α 细胞,应用蛋白质印迹法检测单用、两两联合及三者联合对PML-RARα的降解及自噬相关因子(p-mTOR、LC3B)的作用.分别联用蛋白酶体抑制剂卡非佐米及自噬抑制剂巴佛洛霉素A1,应用蛋白质印迹法检测各组细胞中PML-RARα的降解情况.结果 与对照组(不用药物干预)比较,雄黄浓度为0.5 μmol/L,作用于PML-RARα野生型及突变型PMLA216T-RARα 时,均使PML-RARα发生了明显降解(均P＜0.01),突变型PMLA216T-RARα表达的PML-RARα均比野生型高(均P＜0.01).与对照组比较,雄黄4μmol/L、靛玉红8umol/L、丹参酮Ⅱa 8 μmol/L作用于PMLA216T-RARα时,均使PML-RARα发生降解(均P＜0.01),可降低p-mTOR水平(均P＜0.01),升高LC3B水平(P＜0.05,P＜0.01),雄黄+丹参酮Ⅱa+靛玉红三者联合时上述作用最强(P＜0.01).与对照组比较,雄黄+丹参酮Ⅱa+靛玉红、雄黄+丹参酮Ⅱa+靛玉红+卡非佐米联用作用于PMLA216T-RARα时,均使PML-RARα发生明显降解(均P＜0.01);与对照组比较,单用卡非佐米、单用巴佛洛霉素A1、雄黄+丹参酮Ⅱa+靛玉红+巴佛洛霉素A1,作用于PMLA216T-RARα时,均使PML-RARα发生了明显蓄积,且雄黄+丹参酮 Ⅱa+靛玉红+巴佛洛霉素A1组PML-RARα表达高于单用卡非佐米及单用巴佛洛霉素A1组(均P＜0.01).结论 靛玉红及丹参酮Ⅱa联用可通过自噬增强雄黄对突变型PMLA216T-RARα的降解作用,三者联用自噬作用最强,可能为复方黄黛片治疗急性早幼粒细胞白血病的作用机制之一.