氧化苦参碱对微小隐孢子虫感染小鼠肠黏膜Toll样受体的影响

目的 研究氧化苦参碱(OMT)对微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)感染小鼠肠黏膜Toll样受体2 (TLR2)和TLR4的调节作用,探讨OMT治疗隐孢子虫病的分子机制. 方法 30只雄性健康BALB/c小鼠随机分为感染组、感染后OMT治疗组(简称OMT治疗组)和未感染组,每组10只.感染组和OMT治疗组小鼠经口灌胃微小隐孢子虫卵囊(1×105个/只),建立微小隐孢子虫肠道感染小鼠模型,未感染组小鼠正常饮食、饮水.OMT治疗组小鼠建模成功后经口灌胃OMT (50 mg/kg),每日1次,连续2周.采用金胺酚1改良抗酸染色法镜检计数小鼠克粪便卵囊数.治疗2周后剖杀各组小鼠,HE染色镜下观察小鼠肠黏膜的病理改变,测量肠绒毛高度、隐窝深度.抽提小鼠肠黏膜组织总RNA,逆转录成cDNA,实时荧光定量PCR (qRT-PCR)检测TLR2和TLR4的mRNA相对表达量.蛋白质印迹(Western blotting)检测小鼠肠黏膜组织中TLR2和TLR4的相对表达量. 结果 金胺酚1改良抗酸染色镜检结果显示,感染组小鼠克粪便卵囊数自建模成功后逐渐增加,至第7天达到最高,为(179.24±21.12)个/克,感染强度为4级,然后趋于平衡.OMT治疗组小鼠克粪便卵囊数在治疗第5天开始下降,治疗2周后,感染强度趋近于0级.HE染色镜下观察结果显示,感染组小鼠肠绒毛明显萎缩变短、脱落,黏膜下层结构严重水肿,与肌层间形成明显的间隙;OMT治疗组小鼠肠绒毛基本修复,结构趋于完整,排列趋于整齐;未感染组小鼠肠绒毛结构完整.OMT治疗组小鼠肠绒毛高度为(346.1±19.2) μm,高于感染组[(278.0±52.9) μm] (P＜ 0.01),与未感染组[(348.1±18.2) μm]差异无统计学意义(P＞0.05);隐窝深度为(155.4±5.3) μm,低于感染组[(173.1±11.1) μm] (P＜0.05),与未感染组[(149.9±27.4) μm]差异无统计学意义(P＞0.05);绒毛高度/隐窝深度为2.2±0.2,高于感染组(1.6±0.3) (P＜0.01),与未感染组(2.4±0.6)差异无统计学意义(P＞0.05).qRT-PCR结果显示,OMT治疗组小鼠肠黏膜组织中TLR2mRNA的相对表达量为1.4±0.3,低于感染组(3.0±0.1) (P＜0.01),与未感染组(1.0±0.0)差异无统计学意义(P＞0.05);TLR4 mRNA的相对表达量为1.5±0.1,低于感染组(3.1±0.3) (P＜0.01),与未感染组(1.0±0.0)差异无统计学意义(P＞0.05).Western blotting检测结果显示,OMT治疗组小鼠肠黏膜组织中TLR2的相对表达量为0.2±0.0,低于感染组(0.6±0.1) (P＜0.01),与未感染组(0.2±0.1)差异无统计学意义(P＞0.05);TLR4的相对表达量为0.3±0.1,低于感染组(0.6±0.0) (P＜0.01),与未感染组(0.2±0.1)差异无统计学意义(P＞0.05). 结论 OMT可通过下调微小隐孢子虫感染小鼠肠黏膜组织中TLR2和TLR4的表达,可促进小鼠受损肠黏膜的修复.