人脐带间充质干细胞定向诱导分化成类神经元的实验研究

目的：采用不同细胞因子定向诱导人脐带间充质干细胞分化成类神经元，为脐带间充质干细胞移植治疗脊髓损伤提供理论依据。方法：采用Ⅱ型胶原酶消化法分离培养人脐带间充质干细胞，采用流式细胞术鉴定细胞。取第5代细胞随机分成A、B、C、D 4组，在A组基础培养基中加入bFGF，B组中加入bFGF和BDNF，C组中加入bFGF、BDNF和BHA诱导培养，D组为对照组，使用含有10％胎牛血清的DMEM－F12培养基培养。诱导2周后采用实时荧光定量PCR检测细胞的nestin、NEFH和GFAP mRNA表达情况，并通过原子力显微镜观察细胞超微结构的的变化。结果：Ⅱ型胶原酶消化法能成功分离人脐带间充质干细胞。通过流式细胞术检测第3代细胞发现，细胞均强表达CD29、CD44和CD105，而CD34、CD45和HLA－DR均未见表达。经定向诱导分化成类神经元后，原子力显微镜观察细胞表面突起增多，实时荧光定量PCR检测显示nestin在A、B、C组均呈阳性表达，NEFH在A、B组呈阳性表达，而GFAP在A、B、C、D 4组均不表达。 A、B组nEFH和nestin表达具有显著差异（ P﹤0．05）。结论：本实验成功分离培养人脐带间充质干细胞，所培养的细胞扩增迅速，生物学性状稳定；与bFGF单独处理相比，bFGF联合BDNF更能有效诱导人脐带间充质干细胞分化成类神经元。