氯喹在诱导肝癌细胞死亡中的作用机制研究

目的：研究自噬抑制药物氯喹（chloroquine ，CQ）诱导肝癌细胞死亡的作用机制，探索自噬相关药物可能的临床应用价值。方法：选取3种肝癌细胞系，给予不同浓度CQ干预24 h ，采用M T T法检测细胞的增殖情况，采用碘化丙啶（PI）染色法检测细胞死亡，采用 Hochest33342染色、末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记（TUNEL）染色、Western blotting （caspase‐9）法检测凋亡。采用GFP‐LC3转染、Western blotting （LC3）及细胞电镜技术检测细胞自噬功能。结果：M T T检测显示，CQ作用24 h能够显著抑制肝癌细胞增殖。CQ （≥20μmol／L ）干预后，PI染色阳性细胞明显增多，Hochest33342核染色显示核浓聚、核碎裂，TUNEL染色阳性细胞明显增多，caspase‐9活化；而CQ（5、10μmol／L）干预后PI染色阳性细胞数目无明显变化。CQ处理细胞后，GFP‐LC3阳性细胞明显增多，LC3‐Ⅱ蛋白表达明显增高。同时用caspase抑制剂Z‐VAD‐FMK和3‐MA或沉默Atg5的表达预处理，可显著抑制40μmol／L CQ诱导的MHCC97‐L细胞的死亡。结论：CQ可以抑制肝癌细胞自噬降解，导致自噬小泡及自噬标志性蛋白积聚。大剂量CQ直接诱导肝癌细胞死亡，其死亡形式既具有凋亡的特征又具有自噬样死亡的特征。