NMHC-ⅡA蛋白的重组表达、多克隆抗体制备及其功能的初步探讨

目的 对人源非肌肉肌球蛋白重链ⅡA(NMHC-ⅡA)蛋白进行重组表达、纯化并制备其多克隆抗体,初步探讨其生物学功能.方法 将MYH9编码基因克隆于原核表达载体pGEX-4T-1,IPTG诱导重组表达.以谷胱甘肽琼脂糖凝胶珠纯化产物为免疫原制备兔抗NMHC-ⅡA多克隆抗体,经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析和免疫印迹(Western-blot)检测抗体特异性;采用酶联免疫吸附法(ELISA)对纯化抗体的活性进行评价;采用抗体阻断试验进一步证实NMHC-ⅡA在EB病毒(EBV)感染鼻咽上皮细胞中的作用.结果 本研究生产和纯化两株多克隆NMHC-ⅡA抗体的浓度分别是600 μg/mL和1.35 mg/mL.制备的NMHC-ⅡA多克隆抗体以剂量依赖性的方式抑制EB病毒感染上皮细胞.结论 本研究成功实现NMHC-ⅡA的重组表达、抗体制备,实现了对其功能的初步研究,为其在鼻咽癌的发生发展过程中进一步深入研究奠定了基础.