人三阴性乳腺癌细胞耐药株的建立及特性研究

目的：建立人三阴性乳腺癌细胞株MDA‐MB‐231的多西紫杉醇（Doc）耐药模型（MDA‐MB‐231／Doc）和表阿霉素（Epi）耐药模型（MDA‐MB‐231／Epi），探讨其生物学特性。方法采用Doc和EPi低浓度逐步加量诱导法历时12个月分别建立MDA‐MB‐231／Doc和MDA‐MB‐231／Epi耐药细胞株。通过细胞形态学观察、M T T法和流式细胞术分析、比较其生物学特性，实时荧光定量PCR检测多药耐药基因（MDR1）mRNA表达，Western Blot法检测 P糖蛋白（P‐gp）、雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）和人表皮生长因子受体2（Her‐2）的表达状况。结果所构建的MDA‐MB‐231／Doc和MDA‐MB‐231／Epi耐药株可分别在12 nmol／L Doc和800 nmol／L Epi中稳定生长，在相同的药物浓度下，耐药细胞株的生长增殖率明显高于亲代细胞，其耐药指数分别为亲代敏感细胞的8．32倍和64．93倍，且相互呈交叉耐药状态。与亲代细胞相比，两株耐药细胞处于G1期和G2期的细胞增加、处于S期的细胞减少，随撤药时间的延长，细胞的增殖速度加快。两株耐药株的MDR1基因表达水平增高，分别为亲代细胞的4．05倍和5．96倍，P‐gp表达为阳性。与MCF‐7细胞株相比，MDA‐MB‐231细胞株ER、PR、HER2表达阴性，是典型的三阴性乳腺癌细胞株。结论成功建立MDA‐MB‐231／Doc和MDA‐MB‐231／Epi的耐药细胞株，其生长及耐药性稳定。