变性梯度胶电泳对结膜炎细菌多态性分析

目的 应用聚合酶链反应-变性梯度胶电泳(PCR-DGGE)研究泪液细菌多态性和致病病原体.方法 直接从泪液标本中抽取总DNA,扩增16S rDNA V3区,DGGE分离后测序与传统培养方法进行比较,并作出相应的评价.结果 检测131份标本,其中59份化脓性结膜炎标本54份呈阳性结果,39份非化脓性结膜炎标本15份为阳性,而34份正常泪液标本6例扩增出目的片段.检测细菌种类依次为:葡萄球菌、棒状杆菌、链球菌、不动杆菌、枯草杆菌、假单胞菌、丙酸菌属及泛菌属.有3个序列在属的水平上不能被确定,其序列分别与肠细菌、不经培养的真细菌及不经培养的β蛋白细菌有高度的序列相似性.培养方法只对葡萄状球菌、棒状杆菌、链球菌、假单胞菌,以及克雷伯氏杆菌属呈阳性.结论 PCR-DGGE印迹技术和16S rDNA序列分析能快速识别细菌性结膜炎患者中的病原菌,而且是检测和鉴定那些不能用传统培养法检测的单种细菌或多种细菌眼部感染的较为适宜的方法.