亚致死性高热抑制MCF-7细胞侵袭性的研究

目的 亚致死高热对乳腺肿瘤细胞生物学行为的影响是热消融技术在临床应用和推广中最值得关注的问题之一.本研究观察亚致死性高热对人乳腺癌MCF-7细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响,并初步探讨上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关标志物的变化情况.方法 将体外培养的MCF-7细胞置于44、47和50℃的水浴锅中加热10 min,以模拟热消融术中产生的亚致死性高温环境,而后采用CCK-8、Transwell实验和蛋白质印迹法检测存活细胞的增殖、侵袭及迁移能力,以及存活细胞中EMT相关指标的表达情况.结果 乳腺癌MCF-7细胞经亚致死性高热作用后细胞形态发生变化,部分细胞趋于梭形.流式细胞仪检测结果显示,实验组44、47和50℃于12h的细胞存活率分别为(83.4±1.1)％、(80.1±1.2)％和(76.6±1.9)％,明显低于对照组的(89.3±1.6)％,H=10.385,P=0.016;实验组50℃细胞存活率较对照组明显降低,P=0.013.CCK-8结果显示,与对照组相比,实验组12h后各时间点人乳腺癌MCF-7细胞数均有减少,47和50℃实验组24 h后以及44℃实验组3d后对细胞增殖具有明显抑制作用.在迁移实验中,每个高倍视野下实验组44、47℃穿过Transwell小室基底膜的细胞数分别为(154±12)、(43±8)个,明显低于对照组的(180±20)个,H=11.395,P=0.003;实验组47℃穿膜细胞数较对照组明显减少,P=0.002.在侵袭实验中,每个高倍视野下实验组44、47℃穿过Transwell小室基底膜的细胞数分别为(86±7)、(47±10)个,明显低于对照组的(126±16)个,H=12.500,P=0.002;实验组47℃较对照组穿膜细胞数明显减少,P=0.001.全蛋白免疫印迹结果显示,44、47℃实验组E-cadherin/GAPDH分别为0.810±0.048、0.763±0.059,与对照组的0.849±0.046相比,差异无统计学意义,H=3.200,P=0.202;44、47℃实验组Vimentin/GAPDH分别为0.161±0.020、0.163±0.020;与对照组的0.155±0.021相比,差异无统计学意义,H=0.800,P=0.670.结论 亚致死性高热能够抑制乳腺癌细胞增殖的同时尚可抑制其迁移及侵袭能力,而并不诱导其发生EMT样改变,提示热消融技术可能在灭活靶区肿瘤细胞的同时短时间内抑制可能残留的肿瘤细胞的增殖、迁移及侵袭能力,为下一步治疗争取时间,是一种较为安全的乳腺癌局部治疗手段.