补阳还五汤及其拆方对脑缺血大鼠神经功能及血管生成的影响

目的：探讨补阳还五汤及其拆方对局灶性脑缺血后大鼠神经功能和血管生成的影响及机制。方法采用随机数字表法，将清洁级SD雄性大鼠（52只）随机分为假手术组、模型组、全方组、补气组、活血组，每组各8只。除假手术组外，其余各组大鼠均采用线栓法建立大脑中动脉闭塞模型，以首次Longa神经功能评分1～3分者为造模成功。补阳还五汤全方由黄芪120.0 g、当归6.0 g、赤芍4.5 g、川芎3.0 g、地龙3.0 g、红花3.0 g、桃仁3.0 g组成，补气方由黄芪120.0 g组成，活血方由当归6.0 g、赤芍4.5 g、川芎3.0 g、地龙3.0 g、红花3.0 g、桃仁3.0 g组成。术后第1天开始灌胃给药，全方组、补气组、活血组灌胃剂量分别为13.1、10.8、2.2 g／ kg，假手术组和模型组分别灌服等容量的等渗盐水，1次／ d，连续14 d。腹腔注射5-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU，50 mg／ kg），1次／ d，连续14 d。在术后第1、7、14天，采用改良的神经症状严重程度评分（mNSS）和角实验评价感觉运动功能。术后第14天，采用BrdU和大鼠血管性血友病因子（vWF）免疫荧光双标检测缺血周边区血管生成情况；Western Blot检测血管内皮生长因子（VEGF）的蛋白表达。结果（1）与模型组比较，术后第7、14天，全方组大鼠mNSS评分较低[（6.8±1.0）分比（8.5±1.1）分、（6.1±0.8）分比（8.0±1.4）分，均P ＜0.01]，全方组右转次数减少[（7.1±0.6）次比（8.6±1.2）次、（6.1±0.8）次比（7.9±1.1）次，均P ＜0.01]，补气组右转次数减少[（7.5±0.5）次比（8.6±1.2）次、（6.2±1.0）次比（7.9±1.1）次，均P ＜0.01]；术后第14天，全方组缺血周边区BrdU／ vWF标记免疫阳性细胞数量明显增多，组间差异有统计学意义[（30±8）个／ mm2比（24±7）个／ mm2，P ＜0.01]，VEGF 蛋白表达增加[（0.33±0.01）比（0.30±0.01），P ＜0.01]。（2）与补气组比较，术后第7、14天，全方组大鼠mNSS 评分较低[补气组分别为（8.2±1.3）、（7.5± 0.9）分，均P ＜0.05]，术后第14天，全方组缺血周边区BrdU／vWF免疫阳性细胞增多[补气组为（26±5）个／ mm2，P ＜0.05]，VEGF 蛋白表达增加[补气组为（0.31±0.01），P ＜0.01]。（3）与活血组比较，术后第7、14天，全方组大鼠mNSS评分较低[活血组分别为（8.5± 0.9）、（7.6± 0.7）分，均P ＜0.05]，右转次数减少[活血组分别为（8.5± 0.8）、（7.6± 0.9）次，均P ＜0.05]，术后第14天，全方组缺血周边区BrdU／ vWF免疫阳性细胞增多[活血组为（26±6）个／ mm2，P ＜0.05]，VEGF 相对表达水平升高[活血组为（0.31±0.01），P ＜0.05]。结论补阳还五汤能促进脑缺血后血管生成和神经功能恢复，其机制可能与上调VEGF蛋白有关，方中补气药和活血药具有协同作用。