地昔帕明逆转人脑胶质瘤耐药细胞U251/TR对替莫唑胺的耐药作用

目的探讨抗抑郁药地昔帕明（DMI）对人脑胶质瘤耐药细胞（U251/TR）对替莫唑胺（TMZ）耐药作用的影响及其机制。方法 DMI 20~80μmol·L-1或TMZ 0.5~10 mmol·L-1处理U251/TR细胞24 h，用CCK-8法测定DMI和TMZ对U251/TR细胞增殖抑制的半数有效量（IC50）。CCK-8检测TMZ（1和2 mmol·L-1）和DMI （20，30和40μmol·L-1）联合或单独处理U251/TR细胞24 h对细胞增殖抑制的影响，用金正均法计算Q值来评价两种药物的协同效应。TMZ（1 mmol· L-1）和DMI（30μmol·L-1）联合或单独处理U251/TR细胞24 h，以Hoechst33258染色观察细胞核形态，发光法检测胱天蛋白酶3活性；实时定量PCR和Western蛋白印迹法检测C/EBP同源蛋白（CHOP）的表达；小干扰RNA（siRNA）沉默CHOP的表达后，观察TMZ （1 mmol · L-1）和 DMI（30μmol · L-1）联合给药对U251/TR增殖抑制的影响。结果 DMI或TMZ单用对U251/TR细胞增殖均有明显的抑制作用，并且呈浓度依赖性（r 2=0.983，0.982，P<0.05），IC50分别为（33.6±0.5）μmol· L-1和（2.5±0.6）mmol· L-1。TMZ（1和2 mmol·L-1）和DMI（20，30和40μmol·L-1）联合给药能24 h对U251/TR细胞的增殖抑制率明显强于单独给药，以金正均法计算联合给药的Q值均>1.15，证实TMZ和DMI联合给药具有协同效应。同时，DMI 30μmol·L-1和TMZ 1 mmol·L-1联和应用可诱导U251/TR细胞凋亡，主要表现为细胞核固缩、染色质沉积和胱天蛋白酶3的激活。这种凋亡诱导作用明显好于单独给药的效果（P<0.05）。DMI 和TMZ联合应用能显著激活细胞内质网应激标志蛋白CHOP的表达（P<0.05）。以siRNA沉默CHOP表达后，DMI逆转TMZ耐药的作用明显减弱，联合给药组细胞生存率由51.8%升至62.2%（P<0.05）。结论 DMI能逆转人脑胶质瘤细胞U251/TR对TMZ的耐药性，其机制可能与激活CHOP表达有关。