重组病毒法捕获宫颈癌循环肿瘤细胞的初步研究

目的 构建新的含有表达绿色荧光蛋白(GFP)的单纯疱疹病毒(OHSV2-GFP),初步验证其对循环肿瘤细胞特异性示踪作用.方法 采用PCR、分子克隆及同源重组技术,从HG52野生病毒株的基因组中剔除ICP34.5基因并插入GFP表达序列,构建OHSV2-GFP.抽取健康志愿者外周血4mL,将Hela细胞按10、100、500个加入外周血中后,按照MOI=1比例转染重组病毒OHSV2-GFP+,然后用流式细胞仪进行该方法检出率测定;收集40例正常人、15例宫颈炎患者和20例宫颈癌患者外周血4mL,裂解去除红细胞后,按照MOI=1的比例转染重组病毒OHSV2-GFP+,24h后收集细胞,流式细胞仪检测CD45 +/GFP-细胞并计数,初步检测该方法临床应用的可行性.结果 将Hela细胞按10、100、500个加入外周血中后,检测结果 显示,检出数分别为6.3、61.7、300.5,总体检出率为61.7％,线性回归分析显示应用此方法捕获的CTC数量与预先加的肿瘤细胞数呈线性关系,R2≥0.95.官颈癌患者的GFP +/CD45-细胞数(10.90+2.3)个明显高于正常人(0.38±0.12)和官颈炎患者(0.33±0.09)个,差异具有显著性(P＜0.01).结论 本研究应用循环肿瘤细胞能够被该重组病毒捕获的特性,建立一种新的CTCs检测技术,并针对此技术的可靠性进行了证实,为进一步的临床应用研究打下了基础.