DMOG促进骨髓间充质干细胞血管新生作用的研究

目的 探讨在缺氧缺血清环境下,脯氨酸羟化酶抑制剂——二甲基乙二酰甘氨酸(DMOG)促进骨髓间充质干细胞(MSCs)血管新生的作用及其机制.方法 MSCs从大鼠骨髓中分离得到,分为:常氧条件下溶剂对照组(N-DMSO)、缺氧条件下溶剂对照组(H-DMSO)、20 μ M DMOG加药组(D-20μM)、100μM DMOG加药组(D-100μM)及500 μ M DMOG加药组(D-500μM),观察以下指标:(1)通过缺氧条件下CCK-8检测DMOG在20μ M、100μ M及500μM剂量下对MSCs的保护作用,确定DMOG的最佳剂量;(2)通过Matrigel实验观察DMOG促进MSCs血管新生的作用;(3)通过Western blot法检测血管新生通路相关蛋白表达.结果 (1)不同浓度组DMOG对缺氧损伤MSCs的影响:N-DMSO组OD值3.25±0.05,H-DMSO组223±0.14,D-20μM组2.68±0.43,D-100μM组3.11±025,D-500μM组3.23±0.04.与N-DMSO组比较,H-DMSO组OD值降低(P＜0.01),与H-DMSO组比较,D-20μM组、D-100μM组、D-500μM OD值均升高(P＜0.05或0.01).(2)不同浓度组DMOG对正常MSCs的影响:D-20μM组3.19±0.02,D-100μM组3.15±0.06,D-500μM组2.51±0.08.与N-DMSO组比较,D-500μM组OD值降低(P＜0.01),D-20μM组、D-100μM组与N-DMSO组比较差异均无统计学意义(均P＞0.05),提示DMOG在20μM及100μM对细胞无毒性.(3)血管新生相关蛋白的表达:与H-DMSO组相比,D-100 μ M组缺氧3、6及24h HIF-1 α均增加(1.44±0.32 vs 7.79±0.23,2.4±0.28 vs 3.51 ±0.79,0.93±0.37 vs2.46±0.07,P＜0.05或0.01),pAKT则在缺氧6h增加(0.47±0.15 vs 0.71±0.03,P＜0.05),VEGF在缺氧6、24h均增加(0.63±0.10 vs 0.87±0.14,0.42±0.06 vs 0.70±0.06,P＜0.05或0.01),以缺氢24h最为显著.pmTOR/mTOR及pERK/ERK蛋白两组比较差异均无统计学意义(均P＞0.05).结论 DMOG通过抑制HIF-1α降解及促进AKT磷酸化提高缺氧环境下MSCs的血管新生能力.