‘伏令夏橙’原位转化体系的建立及优化

以‘伏令夏橙’实生苗为材料进行原位转化体系建立及优化.首先,研究侵染部位对原位转化效率的影响:使用带有PBI121载体的农杆菌分别侵染5周龄‘伏令夏橙’实生苗上胚轴切口、顶芽切口(保留/去除真叶)2次,共培养3d后进行抗性筛选及暗处理,7周后提取叶片DNA用于转基因植株PCR鉴定;之后,以上胚轴切口作为侵染部位进一步研究苗龄对原位转化效率的影响.研究结果表明,5周龄上胚轴切口再生率为93.10％,转化率为20.68％;保留/去除真叶后侵染顶芽时,再生率分别为81.74％和94.55％,转化率分别为19.09％和17.82％;4周龄和6周龄上胚轴切口再生率为94.59％和91.50％,转化率为25.42％和19.36％.可见利用农杆菌介导的遗传转化法原位转化4周龄‘伏令夏橙’的上胚轴切口可获得较高的转化效率.原位转化操作简单、周期短、转化率高,在甜橙遗传育种研究中具有重要的应用价值.