鸭坦布苏病毒JM株E蛋白的截断表达及间接ELISA方法的建立

本研究利用RT-PCR扩增鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu virus,DTMUV) JM株E基因截断片段(822 bp),并将其克隆至原核表达载体pET32a(+),成功构建了重组质粒pET32a-E.重组质粒转化大肠杆菌Rosseta,经IPTG诱导得到了高效表达.Western blot分析表明,重组蛋白能与DTMUV阳性血清发生特异性反应.将纯化好的DTMUV E蛋-白作为包被抗原,建立了检测DTMUV血清抗体的间接ELISA方法.经过条件优化,确定了抗原最适包被浓度为0.093μg/孔,血清的最佳稀释度为1∶100.批内和批间重复试验的最大变异系数分别为3.53％和9.73％.用建立的ELISA方法对免疫鸭坦布苏病毒灭活疫苗的鸭血清和对照鸭血清进行抗体检测,同时与攻毒保护试验进行比较,两者的阳性符合率为86.67％,阴性符合率为100％.