大豆斑疹病菌tal基因Tn5插入突变体的构建

地毯草黄单胞菌大豆致病变种(Xanthomonas axonopodis pv.glycines,Xag)引起大豆斑疹病,是大豆上重要的细菌病害之一.大豆斑疹病菌通过Ⅲ型分泌系统(type-Ⅲ secretion system,T3SS)将包括转录类似激活因子(transcription activator-like(tal)effectors,TALEs)在内的效应蛋白(T3SS-secreted effectors,T3SEs)注入寄主植物细胞中,从而使寄主植物产生抗病性或感病性反应.为了研究不同tal基因在Xag致病性中的作用,选择ATCC43911菌株为研究对象,根据tal基因的高度保守性,构建了可用于同源交换的含转座子Tn5的pB-C8B::Tn5质粒.通过电转化法转入受体菌细胞中,再进行Km抗性筛选,获得了tal基因插入突变体.Southern杂交结果显示,ATCC43911菌株含有6个tal基因,在Tn5转座子插入后,tal基因的位置发生了变化,杂交信号条带数目增加,并且存在Tn5的单拷贝和双拷贝插入2种形式.这表明Tn5转座子成功插入了tal基因.Tn5插入突变体的构建为进一步分离tal基因以及鉴定其在致病性中的作用奠定了工作基础.