抗Cry1 F毒素单链抗体的筛选及初步应用

对扩增的Tomlinson I 噬菌体抗体库进行3轮特异性富集,挑取单菌落,采用 ELISA、PCR 及测序比对分析鉴定阳性噬菌体单链抗体( scFv)；以宿主替换的方式将阳性噬菌体 scFv 基因导入 Escherichia coli HB2151中进行可溶性表达,scFv 过柱纯化后,建立针对Cry1F毒素的IC-ELISA 检测方法。以Cry1B、Cry1C、Cry1 Ab、Cry1 Ac 作为竞争抑制物,分析scFv的特异性,以Cry1 F毒素在玉米中的添加回收试验评价检测方法的实用性。结果显示,从第3轮富集库中筛选到了11株具有 Cry1F 毒素结合活性的噬菌体 scFv菌株,经PCR 鉴定都含有目的条带,对其中2株( H1、G9)进行测序,证实为人源化的 scFv。选取 G9号阳性噬菌体scFv进行可溶性表达,纯化后收集到的 scFv 浓度为256μg/ml。建立的 IC-ELISA 检测方法检测灵敏度( IC10)为5.99 ng/ml,抑制中浓度( IC50)为0.410μg/ml,线性检测范围( IC20~ IC80)为0.107~0.713μg/ml。 scFv(G9)对Cry1B、Cry1C具有一定结合活性,交叉反应率分别达到了20.92%和15.59%,但不识别Cry1Ab 和Cry1Ac,交叉反应率均低于0.1%。添加回收试验结果表明,基于scFv(G9)建立的IC-ELISA 检测方法稳定性和重复性都比较好。