猫传染性腹膜炎病毒AH1905株N基因的生物信息学分析及原核表达

为了解猫传染性腹膜炎病毒(feline infectious peritonitis virus,FIPV)在中国的流行与遗传变异情况,对新分离的FIPV AH1905株的N基因进行了克隆和序列比对分析,并利用生物信息学软件对N基因编码蛋白的二级结构进行了预测.最后,将N基因克隆至原核表达载体pGEX-4T-1,在原核细胞中进行表达,并制备鼠源多克隆抗体.测序结果表明,FIPV AH1905株的N基因全长1134 bp,编码377个氨基酸.序列比对分析结果显示,FIPV AH1905株与报道的FIPV参考毒株的核苷酸同源性为90.2％ ～92.4％,氨基酸同源性为91.8％ ～93.9％,与国内其他分离株位于同一进化分支,同属于FIPV基因Ⅰ型.对N蛋白二级结构预测结果显示,该蛋白具有高度亲水性,其二级结构主要由α螺旋(h)(14.06％)、延伸链(e)(15.12％)、β转角(t)(3.71％)和无规则卷曲(c)(67.11％)组成,无信号肽区域和跨膜结构域,存在48个潜在的磷酸化位点,含有6个潜在的B细胞抗原表位、2个CTL表位和2个Th表位.Western blot检测结果证明,N蛋白在大肠埃希菌细胞中主要以包涵体形式大量表达,相对分子质量约为68 ku,具有良好的反应原性.以上结果可为进一步开展FIPV的流行病学和分子生物学研究奠定基础.