嗜热革节孢内切葡聚糖酶EGⅠ中精氨酸Arg7的功能分析

本研究将嗜热革节孢GH45家族内切葡聚糖酶EGⅠ中的底物结合位点精氨酸Arg7进行饱和突变,测定其性质、动力学参数的变化,以期分析精氨酸Arg7的功能.结果表明,与原酶相比,突变酶R7 A的Km有所下降,R7P的kcat显著性提高,但突变酶的kcat/Km均显著性降低.原酶的最适反应温度为50℃,突变酶R7C、R7P和R7V的则为40℃,其余突变酶的均为50℃.原酶于70℃下处理2 h具有61％的活性,相同处理条件下,突变酶R7F、R7H仍具有70％以上的活性,说明其热稳定性明显提高,R7A仅有20％的活性,剩余突变酶均有40％左右的活性.原酶的反应最适pH值为5.0,而突变酶R7C的为6.0,剩余突变酶的均为5.0.本试验探究了精氨酸Arg7饱和突变后嗜热革节孢GH45家族内切葡聚糖酶的性质变化,可为GH45家族进一步的分子改造和功能研究提供参考.