替莫唑胺诱导的小鼠胶质瘤耐药动物模型的建立

目的 通过颅内原位成瘤小鼠体内连续传代技术,建立更为有效的替莫唑胺(TMZ)耐药胶质瘤模型,评估其耐药性和相关生物学特性.方法 取成年C57BL/6小鼠78只,按随机数字表法分为6组(13只/组):诱导组共3组(小剂量、中剂量和大剂量诱导组),对照组共3组(不给药组、中剂量和大剂量对照组).每组中5只磁共振评估肿瘤大小,5只观察小鼠生存,3只取肿瘤行原代培养.使用GL261鼠胶质瘤细胞系,对诱导组1和对照1、2、3组小鼠行原位成瘤.诱导组1使用小剂量TMZ(5mg/kg)诱导5d后停药10 d,再将诱导组1小鼠取瘤制备单细胞悬液,流式分选得到胶质瘤细胞后继续培养,用于接种诱导组2.中剂量TMZ(25 mg/kg)处理诱导组2荷瘤鼠,同法取瘤分选后培养并接种诱导组3,大剂量TMZ(50mg/kg)处理诱导组3荷瘤鼠.以此逐代适度递增药物剂量诱导耐药,建立小鼠胶质瘤TMZ耐药模型.对照组1使用不含TMZ的溶剂对照处理,对照组2、3分别使用中、大剂量(25、50 mg/kg)TMZ处理.细胞集落法检测每代小鼠原位肿瘤细胞的TMZ耐药性;CCK8法检测TMZ作用下的细胞耐药指数.结果 成功建立了小鼠胶质瘤TMZ耐药模型并确定了其耐药性.大剂量诱导组细胞相对集落率明显高于大剂量对照组(P＜0.05),相比于不给药组产生了4.25倍耐药性.大剂量TMZ能明显减小对照组荷瘤鼠肿瘤体积(P＜0.05),而大剂量诱导组肿瘤体积明显大于大剂量对照组(P＜0.001),且荷瘤鼠生存时间较大剂量对照组明显缩短(P=0.0018).结论 逐代适度递增药物剂量刺激原位成瘤小鼠,能建立更为有效的小鼠胶质瘤TMZ耐药株模型.