重组和天然HBHA蛋白制备及其活性研究

目的 制备天然和重组HBHA蛋白,并比较其诱导产生的抗体对其聚集BCG活性的抑制效应.方法 将7H9液体培养基中的BCG培养至稳定生长期,用CL-6B层析柱分离纯化HBHA蛋白(nHBHA).同时,克隆HBHA基因片段,表达于大肠杆菌BL-21中,经亲和层析法纯化蛋白,并以此免疫新西兰兔制备多克隆抗体.在BCG的液体培养基中分别加入不同浓度的HBHA蛋白,观察菌体的聚集情况.同时,用抗HBHA抗体与HBHA蛋白孵育后,加入BCG培养基中,观察菌体聚集情况.结果 获得天然HBHA蛋白纯度为99%,浓度为1.016 mg/ml.重组蛋白表达量约占菌体蛋白总量的36%,纯化得到纯度为97.1%,浓度为10.98 mg/ml的重组HBHA蛋白.所得天然和重组蛋白均有诱导BCG聚集的作用,当nHBHA浓度为0.2μg/ml时BCG出现少量聚集,而rHBHA浓度达到2μg/ml时BCG才出现聚集.并且此聚集现象均可被多克隆抗体抑制.结论 成功获得天然HBHA和重组HBHA蛋白;证实了两者均具有促进BCG聚集的功能,并可被由重组HBHA诱导产生的多克隆抗体所抑制.从而为进一步研究HBHA的临床诊断和疫苗价值提供了实验依据.