CB 18. Imunogenicidade de uma vacina codificando epítopos para linfócitos CD4+ do HIV (HIVBr18) na forma de partículas vírus-símile (VLP)

Introducao: A infeccao pelo virus da imunodeficiencia humana (HIV) e a mais grave infeccao emergente do seculo XX e inicio do seculo XXI. Segundo a OMS, existem cerca de 38,8 milhoes de individuos portadores do HIV e o mesmo foi responsavel por cerca de 20 milhoes de mortes. Vacinas baseadas na inducao de respostas de celulas T podem reduzir a progressao para AIDS, alem de diminuir a transmissao do virus pela geracao de respostas amplas e funcionalmente relevantes. Nosso grupo desenvolveu, previamente, uma vacina de DNA (HIVBr18) codificando epitopos de linfocitos T CD4+ do HIV-1. A vacina HIVBr18 foi capaz de induzir respostas de celulas T CD4+ e T CD8+ amplas, de longa duracao e polifuncionais dirigidas contra epitopos em regioes conservadas do HIV. Uma das limitacoes das vacinas de DNA e sua limitada imunogenicidade em primatas nao humanos e humanos quando comparada a observada em camundongos e, portanto, estrategias vacinais alternativas vem sendo avaliadas. As particulas virus-simile sao semelhantes em tamanho e conformacao a virions intactos, sem capacidade de replicacao e patogenicidade, mas com alta imunogenicidade e com propriedade de induzir resposta imune celular e humoral, mimetizando a forma natural de componentes virais. Objetivo: Avaliar o potencial imunogenico do inserto HIVBr18 na forma de plasmo-VLP (pVLP-HIVBr18). Metodologia: Para obtencao dos plasmideos, bacterias DH5a competentes foram transformadas com os plasmideos pVAX (controle), pVAX-HIVBr18, e pVLP-HIVBr18, e o DNA foi purificado utilizando o kit comercial Endofree Plasmid Giga kit (Quiagen). Apos a purificacao, foi realizada a analise por enzimas de restricao e eletroforese em gel de agarose para verificar a integridade dos plasmideos. Para as imunizacoes, camundongos femeas da linhagem BALB/c, receberam 3 doses de 100ug dos diferentes plasmideos pela via intramuscular, com intervalo de duas semanas. Duas semanas apos a ultima dose, os esplenocitos foram isolados apos eutanasia e a producao de IFNγ por celulas T antigeno-especificas foi avaliada pelo ensaio de ELISPOT. A contagem do numero de celulas produtoras de IFNγ foi realizada pelo leitor de ELISPOT AID ELISPOT reader e os resultados expressos em unidades formadoras de spots por 106 celulas. Resultados e Discussao: Apos a purificacao do DNA, foi realizada a analise de restricao com as enzimas HindIII e XhoI para o plasmideo HIVBr18 e EcoRI para o pVLP-HIVBr18. A analise de restricao dos plasmideos revelou a liberacao dos insertos com o tamanho esperado para cada plasmideo e confirmou a integridade das construcoes. Os esplenocitos dos camundongos imunizados com a vacina pVAX-HIVBr18 e estimulados com os 18 peptideos individuais do HIV-1 secretaram IFNγ direcionados a 8 peptideos codificados pela vacina, enquanto que nos animais imunizados com a formulacao pVLP-HIVBr18, os esplenocitos estimulados secretaram IFNγ direcionado a 5 peptideos. Conclusao: A imunizacao com a vacina pVLP-HIVBr18 induziu uma resposta de menor amplitude e magnitude que a vacina de DNA HIVBr18.