Développement et validation du diagnostic d’espèce de Malassezia par MALDI-TOF

Les levures du genre Malassezia sont commensales de la peau humaine. Elles sont impliquees dans des infections dermatologiques comme le pityriasis versicolor ou la dermatite seborrheique. Elles sont egalement isolees dans des infections plus profondes comme les fongemies, particulierement chez certains patients a risque : les nouveaux nes, les porteurs de catheters de nutrition parenterale. L’epidemiologie et la virulence de chaque espece sont peu connues a ce jour. Ceci est notamment du a la difficulte a differencier les especes entre elles. Actuellement, l’identification d’espece est presomptive et repose sur des caracteres morphologiques et biochimiques. Seule la biologie moleculaire permet d’identifier les especes avec certitude mais c’est une technique longue et couteuse. Les objectifs de ce travail etaient de permettre le diagnostic d’espece de ces levures par : - une meilleure connaissance des caracteres culturaux et morphologiques de ces levures ; - le developpement et la validation d’une base de donnees d’empreintes spectrales permettant l’identification des especes de Malassezia par spectrometrie MALDI-TOF Biflex III de Bruker daltonics. 85 souches de Malassezia issues de patients hospitalises a Strasbourg, Nancy, Nantes et Poitiers ont ete recrutees. Chaque souche a ete identifiee par sequencage des regions ITS 1 et 4 et comparee a la base de donnees du CBS et a GenBank. Les caracteres morphologiques et culturaux de chaque souche ont ete releves et certaines caracteristiques propres a chaque espece ont ete mises en evidence mais restent insuffisantes pour l’identification. Une base MALDI-TOF Malassezia a ete creee. Cette base repertorie 45 souches reparties sur 6 especes M. furfur, M. sympodialis, M. slooffiae, M. globosa, M. restricta et M. pachydermatis. La base Malassezia obtenue permet d’identifier a l’espece 100 % des 40 souches de Malassezia inconnues testees (log scores u003e 2,0). Les tests de repetabilite et de reproductibilite de la technique realises ont montre des coefficients de variation inferieurs a 10 %. Ce travail nous a permis de mettre au point une technique d’identification rapide, fiable et peu couteuse de 6 especes de Malassezia au laboratoire. Un enrichissement de la base par les especes non encore representees permettra par la suite de mieux connaitre l’epidemiologie de ces levures.