低氧降低肺腺癌A549细胞紫杉醇敏感性及其机制的探讨

目的:研究低氧环境下肺腺癌A549细胞对紫杉醇的敏感性及凋亡的变化,并探讨其可能的作用机制.方法:A549细胞加入不同浓度的紫杉醇(6.25、12.5、25、50和100 nmol/L)后,分别在常氧和低氧条件下培养24 h,采用CCK-8法检测紫杉醇对A549细胞增殖的抑制作用;FCM法检测对细胞周期和凋亡的影响;实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测各组细胞中缺氧诱导因子1α (hypoxiainducib1e factor-1α,HIF-1α)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及p-微管蛋白Ⅲ (class Ⅲ beta tubulin,p-tubulin Ⅲ)mRNA和蛋白的表达情况.以未用紫杉醇处理的常氧组和低氧组A549细胞分别作为对照.结果:常氧条件下紫杉醇对A549细胞的半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)值为(14.35±1.95) nmol/L,低氧条件下则为(20.54±2.22) nmol/L,两者间差异有统计学意义(P＜0.05);2种培养条件下,紫杉醇浓度从12.5～100 nmol/L对A549细胞增殖的抑制率差异均有有统计学意义(P值均＜ 0.05).与常氧下相比,低氧下紫杉醇诱导的细胞凋亡和G2/M期细胞阻滞明显减少(P＜0.01和P＜0.05).低氧组中HIF1-α、VEGF、β-tubulin Ⅲ mRNA和蛋白的表达水平均明显上升(P值均＜0.01),但紫杉醇处理能明显下调它们的表达(P值均＜ 0.01);低氧+紫杉醇组中HIF-1α、VEGF、β-tubulin Ⅲ mRNA和蛋白的表达水平均较常氧+紫杉醇组明显升高(P值均＜ 0.01).结论:低氧可降低A549细胞对紫杉醇的药物敏感性,这可能与低氧环境下HIF1-α、VEGF及β-tubulinⅢ的高表达有关.