改良培养基对体外培养生精细胞增殖分化的影响

探讨改良培养基对体外培养小鼠生精细胞的增殖分化效应.根据培养基的不同分为:A组(基础培养液组);B组[基础培养液+胶质细胞神经营养因子(GDNF)+表皮生长因子(EGF)组];C1、C2和C3组[A组+20％、40％、80％睾丸液(TA)];D1、D2和D3组(B组+20％、40％、80％TA).采用上述8种培养基对7～8日龄小鼠生精细胞进行体外培养,通过细胞形态学观察、细胞存活率和粗线期精母细胞特异性基因P19、单倍体精子细胞特异性基因TP1检测及染色体倍性分析,探讨TA、GDNF和EGF对小鼠体外培养生精细胞的增殖分化效应,结果如下:(1)形态学观察表明,B组生精细胞生长速度快,形态好,细胞集落多,A组最差;C组和D组细胞传代后培养时间最长,可达4个月.(2)生精细胞存活率结果显示,培养20 d的B组细胞存活率显著高于其他各组(P＜0.05),C、D组在各培养阶段与A组间无显著性差异.(3) TP1/P19培养15 d后B组的TP1/P19显著高于其他各组(P＜0.05),其他各组间均无显著性差异.(4)单倍体精子细胞比例结果表明,培养15 d后的B组单倍体细胞比例显著高于其他各组(P＜ 0.05),其他各组间单倍体细胞比例均无显著性差异.GDNF和EGF可显著提高生精细胞体外培养的增殖分化效应,而睾丸液可显著延长生精细胞体外培养时间.