Detektion von K-ras Mutationen beim Pankreaskarzinom — Molekularbiologisches Verfahren zum Nachweis einer minimalen lymphatischen Tumorzelldissemination?

Einleitung: Die Prognose von Patienten mit einem duktalen Pankreaskarzinom ist weiterhin unbefriedigend. Ursächlich hierfür könnte eine frühe minimale Tumorzelldissemination sein, welche immunhistochemisch nachgewiesen werden kann. K-ras Mutationen an Position 1 und 2 im Codon 12 finden sich in über 80% der Patienten mit einem Adenokarzinom des Pankreas und lassen sich mit verschiedenen Techniken nachweisen. Ziel der vorliegenden Studie ist es anhand der K-ras Mutationen in Lymphknoten ein molekularbiologisches Verfahren zum Nachweis disseminierter Tumorzellen zu evaluieren, welches im Gegensatz zur immunhistochemischen Evaluation den gesamten Lymphknoten in einem Ansatz untersuchen kann. Methoden: Aus dem operativ entfernten Tumor- und Lymphknotengewebe von Patienten mit einem histologisch gesicherten Adenokarzinom des Pankreas wurde DNA extrahiert. Zur Detektion der bekannten Mutationen im Codon 12 haben wir eine Allelspezifische PCR entwickelt. Nach einer I. PCR zur Amplifizierung des K-ras-Genab-schnittes, erfolgt eine PCR-Reinigung, dessen Produkt als Substrat für die Allelspezifische DNA dient. Der anschließende Nachweis der PCR-Produkte erfolgt mittels einer Agarose-gelelektrophorese. Ergebnisse: Wir haben 43 Patienten mit einem Adenokarzinom des Pankreas auf die Mutationen untersucht von denen 33 (76,74%) eine oder mehrere der K-ras Mutationen aufweisen. Bei 12 von 53 als histologisch tumorfrei eingestuften Lymphknoten (22,64%) fanden sich eine oder mehrere der Mutationen. Desweiteren wurde Lymphknotengewebe von Patienten mit chronischer Pankreatitis auf das Vorliegen von K-ras Mutationen untersucht. In keinem von 20 Lymphknoten konnte hier eine K-ras Mutation nachgewiesen werden. Schlußfolgerung: Bei dem vorliegenden Verfahren handelt es sich um eine molekularbiologische Technik deren Vorteile in der Schnelligkeit und klinischen Anwendbarkeit liegen. Die prognostische Relevanz des Vorliegens von K-ras Mutationen muß anhand prospektiver Studien und der Verlaufsbeobachtung von größeren Patientenkollektiven untersucht werden.