恶性疟原虫谷氨酸脱氢酶在大肠埃希菌中的可溶性表达、纯化和鉴定

目的在大肠埃希菌(E.coli)中尝试非融合蛋白技术可溶性表达恶性疟原虫谷氨酸脱氢酶(GDH),以获得具有相对完整空间表位的重组非融合GDH.方法将恶性疟原虫GDH基因克隆到pET-23(a)表达载体中,转化E.coli BL21菌株,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导表达,菌体反复冻融后,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析表达产物的存在形式,可溶性表达产物经Source-Q及Source-S层析纯化并用SDS-PAGE分析纯度.通过蛋白质印迹试验鉴定表达和纯化产物的免疫学活性.结果可溶性重组GDH分子占宿主蛋白15%左右,相对分子质量为52 000.经过阴离子和阳离子交换层析纯化后,GDH纯度达90%以上.该蛋白质具有良好的抗原性.结论通过E.coli表达系统和柱层析分离技术可获得高纯度、具有相对完整空间表位的重组GDH分子.