肿瘤干细胞在伊马替尼耐药慢性髓系白血病细胞株中的表征

背景:慢性髓细胞白血病因为伊马替尼的应用出现了重大转机.但由于伊马替尼的耐药性,应用该药治疗的白血病患者预后较差,特别是对于急变期白血病患者.目的:观察肿瘤干细胞在伊马替尼STI571耐药的慢性髓细胞白血病细胞系K562中的表征,阐明白血病细胞系对伊马替尼STI571耐药的机制.设计:观察性对比实验.单位:河南省肿瘤医院,河南省血液病研究所.材料:选用5周龄BALB/c-nu/nu小鼠30只,雌性,由中国医学科学院动物中心提供.STI571由北京诺华制药有限公司提供.足叶乙甙(Vp16)购自德国Bristol-Myers Squibb;抗P-gp购自美国Santa Cruz 公司.抗ab1购自美国BD Biosciences公司.实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准.方法:实验于2003-09/2005-11在河南省血液病研究所完成.经过对K562细胞系长期的足叶乙甙(Vp16)诱导和克隆筛选,建立了一株耐药细胞系K562/Vp16;利用干细胞高效能将Hoechst 33342荧光染料泵出细胞的特性,采用流式细胞分选方法从K562/Vp16细胞系中分选出一小群细胞,即边缘细胞(SP),称为K562/Vp16 SP细胞,余下部分为K562/Vp16非SP细胞.为了分析白血病细胞对伊马替尼STI571耐药的机制,分别检测K562,K562/Vp16非SP细胞或K562/Vp16 SP细胞中MDR1,Bcr-Abl和P-gp的表达.另外,按每只BALB/c-nu/nu小鼠1 000个K562、K562/Vp16非SP细胞或K562/Vp16 SP细胞的数量分别对其进行腹腔注射.主要观察指标:K562/Vp16非SP细胞或K562/Vp16 SP细胞对STI571的耐药性和致瘤性.结果:Bcr/Abl和Abl蛋白在K562细胞、K562/Vp16 SP细胞及K562/Vp16非SP细胞中的表达水平差异无显著性意义(P＞0.05);P-gp在K562细胞中不表达,在K562/Vp16 SP及K562/Vp16非SP细胞中均高表达且表达水平一致(P＞0.05);与K562/Vp16非SP细胞比较,K562/Vp16 SP细胞对伊马替尼的耐药性更强,并且这种抗性几乎不能被多种多药耐药逆转剂逆转;另外,体内外实验显示,K562/Vp16细胞的致瘤性几乎全部来源于K562/Vp16 SP细胞.结论:Bcr/Abl基因的扩增、过度表达和多药耐药基因及其蛋白表达产物P-gp的高表达,也许并不是白血病细胞产生对伊马替尼临床耐药的重要机制;白血病细胞对伊马替尼具有一定的抗性,可能与数量极少的白血病干细胞有直接的关系.因此,这类数量极少的干细胞样的肿瘤细胞应当成为有效治疗肿瘤的靶细胞.