大鼠小脑颗粒神经元体外原代培养

目的 体外原代培养大鼠小脑颗粒神经元,为研究慢性砷暴露对小脑神经元的毒性作用提供实验方法.方法 取生后5～7天Wistar仔鼠,体式显微镜下分离小脑皮层,0.25％胰蛋白酶消化、DNA Ⅰ酶洗涤制成单细胞悬液,两次差速贴壁后接种在多聚赖氨酸包被的培养板内,相差镜下观察大鼠小脑颗粒神经元成长、发育变化及突触形成.采用神经元特异性烯醇化酶(NSE)免疫荧光技术鉴定神经元.结果 培养后第24小时,相差显微镜下可见大鼠小脑颗粒神经元贴壁,呈网状排列；第2～3天,神经元胞体由椭圆形变成圆形,轮廓逐渐清晰,细胞伸出突起,突起逐渐延长,细胞间通过突起连接,形成了稀疏的神经元突触网络；第4～6天,细胞体积进一步增大,细胞间通过广泛的突触联系,神经元清晰饱满,形成了复杂的神经元网络.共聚焦显微镜下,可见大量含NSE的神经元.结论 成功地进行了大鼠小脑颗粒神经元的原代培养,该方法可为今后研究慢性砷暴露对小脑细胞的毒性作用提供实验依据.